Po bëjmë edhe eksperimente PCR, pse rezultatet janë gjithmonë shumë më keq se të tjerët?

Po bëjmë edhe eksperimente PCR, pse rezultatet janë gjithmonë shumë më keq se të tjerët?

Në laborator, shikoni PCR-në e të tjerëve, efikasiteti i amplifikimit është i lartë, shiriti elektroforezë është perfekt dhe shikoni vetë, e vështirë për t'u bërë për një kohë të gjatë, ndjeni se reagimi është shumë i mirë, rezultati i një testi pozitiv të rremë ... Çfarë është problemi

Besoj se shumë nga partnerët tanë gjithashtu kanë hasur në probleme të ndryshme. Kur hasim në një mur në eksperimentet e PCR, ne në mënyrë të pavetëdijshme do të analizojmë faktorët brenda sistemit të reagimit, por ne shpesh injorojmë ndikimin e rëndësishëm të materialeve të konsumit në eksperimente.

Rezultati juaj i PCR është i gabuar, harxhimet e PCR mund të jenë arsyeja thelbësore. Nga njëra anë, mikro-kontaminimi i materialeve të konsumit ose futja e frenuesve do të shkaktojë ndotje eksperimentale; Nga ana tjetër, zgjedhja e pahijshme e materialeve të konsumit gjithashtu do të bëjë që rezultatet eksperimentale të vuajnë.

Problemi vjen përsëri. Ekzistojnë shumë lloje të harxhimeve PCR, pra si të zgjidhni ato të duhurat për ta bërë eksperimentin më të qetë? Cilat janë problemet që duhet kushtuar vëmendje? Mos u shqetëso, sotI i kombinuar me përvojë shumë vjeçare, duke zgjidhur problemet e zakonshme të zgjedhjes së materialit shpenzues PCR, shpresoj t'ju ndihmoj.

 

P1: Pse harxhimet e PCR-ve bëhen zakonisht nga materiali PP?

Huida: Meqenëse furnizimet PCR zakonisht janë në kontakt të drejtpërdrejtë me reagensë ose mostra, materialet e polipropilenit (PP) janë biologjikisht inerte, nuk përmbahen në biomolekulare dhe kanë tolerancë të mirë kimike dhe tolerancë të temperaturës (mund të autoklapsohen në 121 ° C, gjithashtu mund të përballojë ndryshimet e temperaturës gjatë ciklit termik).

 

P2: Si duhet të zgjedh midis madhësive të ndryshme të tubave / pllakave PCR?

HUIDA: Qëllimi i përzgjedhjes: zgjidhni produktet e duhura sipas kërkesave specifike eksperimentale. Pjesa më e madhe e madhësisë së tubit PCR mund të plotësojë kërkesat e reaksionit PCR. Mbi këtë bazë, rekomandohet që së pari të zgjidhni tubin me vëllim të ulët. Për shkak se tubi / pllaka e reagimit me vëllim të ulët ka një hapësirë ​​të vogël sipërme, përçueshmëria e nxehtësisë përmirësohet dhe avullimi zvogëlohet. Në të njëjtën kohë, është e nevojshme të shmangni shtimin e shumë ose shumë pak mostrave. Shumë mund të çojë në ulje të përçueshmërisë termike, derdhjes dhe ndotjes së kryqëzuar, ndërsa shumë pak mund të rezultojë në humbje të avullimit të mostrës.

Specifikimet dhe vëllimet e tubave të zakonshëm të reagimit:

Tub i vetëm / i kombinuar: 0.5ml, 0.2ml, 0.15ml

Pllaka 96 pusesh: 0.2ml, 0.15ml

Pllaka 384 pusesh: 0,04 ml

 

P3: Kur sasia e mostrës është e vogël, unë do të zgjedh një tub ose tub të kombinuar, por pse disa kanë mbulesë të sheshtë dhe disa kanë mbulesë konveks?

Huida: Kur sasia e mostrës është e vogël, do të preferohet tubi i vetëm ose tubi i kombinuar. Sidoqoftë, kur vëllimi i reagimit është i madh, tubi i vetëm është dominues, dhe vëllimi mund të arrijë 0,5 ml. Dhe mbulesa e sheshtë dhe mbulesa konveks secila ka avantazhin, specifik mund t'i referohet informacionit të mëposhtëm.

Tub i vetëm: 0.2ml dhe 0.5ml; Mund të zgjedhë sasinë e mostrës në mënyrë fleksibile.

Tubi lidhës: 0.2ml ose 0.15ml është opsional; 8 ose 12 tuba janë të zakonshëm.

Mbulesa e sheshtë: mund të sigurojë transmetim të saktë të sinjalit fluoreshencë për qPCR; Lehtë për të shkruar shenja.

Mbulesa konveks: kontakti me mbulesën e nxehtë të instrumentit PCR për të zvogëluar deformimin e tubit të reagimit të shkaktuar nga presioni; Sidoqoftë, kjo do të ndikojë në transmetimin e sinjalit fluoreshencë dhe nuk mund të zbatohet në eksperimentin e qPCR.

 

Pyetja 4: Pse disa pllaka PCR kanë funde dhe disa jo?

Huida: Në fakt, skaji i pllakës PCR është krijuar për t’u përshtatur më mirë me aplikimet e automatizimit, duke siguruar mbështetje të qëndrueshme dhe qëndrueshmëri mekanike për instrumentin, si dhe qëndrueshmëri më të lartë gjatë procesit të pipetimit.

Pllakat PCR zakonisht ndahen në jo-hemline, gjysmë-hemline dhe hemline të plotë.

Pa Pllaka: I përshtatshëm për shumicën e makinave PCR ose makinave qPCR, por jo për aplikime automatizimi. Stabiliteti nuk është i lartë në procesin e pipetimit, prandaj duhet të përdoret me mbështetjen e pllakave.

Pllaka e skajit të gjysmës së skajit: mund të përshtatet për aplikimin e etiketës ose kodit, dhe aplikimit automatik, dhe ka një qëndrueshmëri të mirë të pipetimit.

Pllaka e skajit të skajit të plotë: shumë e përshtatshme për aplikime të automatizuara eksperimentale, gjithashtu mund të përshtatet me etiketën dhe zbatimin e kodit bar. Ka forcë të mirë mekanike, mund të përdoret në instrumentin PCR të modulit të fryrjes dhe ka qëndrueshmëri të lartë në procesin e pipetimit.

 

P5 :Për pllakat PCR, pse qoshet dhe etiketat nuk janë krejt të njëjta?

Huida: Varet nga efekti i prerjes së këndit dhe shënjimit.

Prerja në qoshe: Zgjedhja e pozicionit të prerjes këndore të pllakës PCR varet nga kërkesat e instrumentit të përshtatshëm për pozicionim të lehtë.

Identifikimi: Shënuesit alfanumerikë në pllakat PCR ndihmojnë në identifikimin e puseve individuale dhe vendndodhjeve të mostrave. Në përgjithësi për logon dixhitale me ngjyra të stampuara ose logon e gdhendur. Për disa aplikacione të automatizuara, pllakat e reagimit të shtypura dhe të shënuara vulosen më mirë.

 

Pyetja 6: Pse disa pllaka PCR janë konvekse ndërsa të tjerat janë të sheshta? Cila është më e mirë?

Huida: Ajo që përshtatet është më së miri. Ekzistojnë dy lloje të pllakave të zakonshme PCR: diferencë e sheshtë e poreve dhe diferencë e lartë e poreve.

Pllaka e reagimit me diferencë të sheshtë, e përshtatshme për shumicën e aparateve PCR.

Pllakat e reagimit me skajet e grykës në rritje lehtësojnë mbylljen e membranës dhe zvogëlojnë rrezikun e ndotjes së kryqëzuar midis mostrave.

 

Huida ka një përvojë shumë vjeçare në prodhimin dhe përpunimin e produkteve PCR dhe standardeve të larta të industrisë. Linja e produkteve është e pasur dhe mund të plotësojë shumicën dërrmuese të aplikacioneve eksperimentale PCR. Ejani dhe zgjidhni produktet e duhura për aplikimet tuaja eksperimentale.

谷歌推广疫情产品PCR


Koha e postimit: Qershor-03-2021